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保健食品中總三萜的測定

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發表時間:2021-08-16 14:21

保健食品中總三萜的測定

來源:保健食品及其原料安全性毒理學檢驗與評價技術指導原則2020年版)


1   范圍

本方法規定了保健食品中總三萜的紫外-可見分光光度測定方法。

本方法適用于以含有三萜類成分為主要原料的保健食品中總三萜含量的測定。

2    原理

試樣用氯仿或乙酸乙酯提取出的三萜類物質,在高氯酸的作用下與香草醛反應產生有色物質。以熊果酸為對照品,采用分光光度法測定總三萜在548nm波長下的吸光度進行定量。

3   試劑和材料

注:除非另有說明,本方法所用試劑均為分析純。

3.1 試劑

3.1.1 乙酸乙酯(CH3COOCH2CH3)。

3.1.2 氯仿(CHCl3)。

3.1.3 冰乙酸(CH3COOH)。

3.1.4 高氯酸(HClO4

3.1.5 香草醛(C8H8O3

3.2 標準品

熊果酸標準樣品的分子式、相對分子量、CAS登錄號見表1,純度≥90%或經國家認證并授予標準物質證書的標準物質

1 熊果酸標準樣品的中文名稱、英文名稱、CAS登錄號、分子式、相對分子量

中文名稱

英文名稱

CAS登錄號

分子式

相對分子量

熊果酸

Ursolic Acid

77-52-1

C30H48O3

456.68

3.3 標準溶液配制

熊果酸標準品溶液(100μg/mL):精密稱取熊果酸標準樣品(3.210mg,至100mL容量瓶中,加乙酸乙酯(3.1.1)溶解并稀釋至刻度,搖勻。

3.4 試劑配制

香草醛冰乙酸溶液(5%:精密稱取香草醛(3.1.50.5g,加冰乙酸(3.1.3)使溶解成10mL,即得。臨用前配制。

4   儀器和設備

4.1 紫外-可見分光光度計。

4.2 分析天平:感量分別為0.01mg0.0001g

4.3 恒溫水浴鍋。

4.4 超聲波清洗器

4.5 離心機

5   分析步驟

5.1試樣制備

5.1.1 固體試樣

取一定量混勻試樣(軟膠囊除外),精密稱定(試樣中總三萜的量約為0.55mg),置50mL量瓶中,加氯仿(3.1.2)約30mL,超聲處理30min,放冷,加氯仿至刻度,搖勻。離心,取上清液備用。

5.1.2 油類制品

準確稱取混勻試樣適量(試樣中總三萜的量約為0.55mg),置于100mL容量瓶中,用乙酸乙酯(3.1.1)溶解并稀釋至刻度,搖勻。

5.1.3 軟膠囊制品

取一定量混勻的凈膠囊內容物,精密稱定(試樣中總三萜的量約為0.55mg),置于100mL容量瓶中,加乙酸乙酯(3.1.1)約60mL,超聲處理30min,放冷,加乙酸乙酯至刻度,搖勻。

5.2 標準曲線的制作

分別精密吸取熊果酸標準品溶液(3.30.000.100.200.400.801.00mL于蒸發皿中,于60℃水浴上蒸干,冷卻后精密加入0.4mL5%香草醛冰乙酸溶液(3.4),轉動蒸發皿使殘渣溶解,再精密加1.0mL高氯酸(3.1.4),混勻后移入10mL具塞比色管中,置60℃水浴加熱15min,取出,冰浴冷卻后,精密加入冰乙酸5.0mL搖勻,15min后以1cm比色池于548nm波長測定吸光度,以吸光度為縱坐標濃度為橫坐標繪制標準曲線。

5.3 試樣溶液的測定

精密量取試樣上清液(5.11.0mL置蒸發皿中,于60℃水浴上蒸干。照標準曲線的制作(5.2)項下,自“冷卻后精密加入0.4mL5%香草醛冰乙酸溶液……起,同法操作,測定吸光度,根據標準曲線得到待測液中總三萜的濃度。

6   結果計算

試樣中總三萜含量按下式計算:

屏幕快照-2021-08-16-下午2.23.15.gif

式中:

Xi試樣中總三萜含量(以熊果酸計),單位為克每百克(g/100g);

Ci由標準曲線查得測定樣液中總三萜質量,單位為微克μg

m試樣的稱樣質量,單位為克g

V1試樣定容總體積,單位為毫升(mL);

V2測定用試樣體積,單位為毫升(mL)。

計算結果以重復條件下獲得的兩次獨立測定結果的算術平均值表示,結果保留三位有效數字。

7   精密度

在重復條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均10%


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